传统ES打靶基因敲除：构建周期长达12个月，存在嵌合体阶段

传统ES打靶基因敲除因嵌合体阳性率较低，并且需要与工具鼠交配才能获得删除Neo的杂合子，因此构建周期长达10-12个月。如何跨越“嵌合体”阶段并自删除Neo以减少两代繁育时间，才是真正快速的关键。

设计优化后：实现跨越“嵌合体”阶段且自删除Neo，减少两代繁育时间

因此周期与cas9构建相近，半年即可

ES打靶技术优势：

1、基因修饰准确、效果稳定；

2、没有脱靶效应，可胜任复杂的基因敲除；

3、自删除Neo可进一步缩短服务周期，简化了小鼠交配流程。

服务流程

小鼠品系

ES细胞品系：C57BL/6N、BALB/c品系

基因敲除小鼠模型

完全性基因敲除小鼠

完全性基因敲除是通过基因敲除技术，把需要敲除目的基因的所有外显子或几个重要的外显子或者功能区域敲除掉，获得全身所有的组织和细胞中都不表达该基因的小鼠模型。

 
应用
用于研究某个基因（要求该基因非胚胎致死性基因）对全身生理病理的功能。

条件性基因敲除小鼠

条件性基因敲除是通过把两个LoxP位点插入到目的基因的一个或几个重要外显子的两端以制备出有两个loxP位点的TurboKnockout-floxed小鼠，TurboKnockout-floxed小鼠在与表达Cre重组酶小鼠杂交之前，目的基因表达完全正常；而当TurboKnockout-floxed小鼠与组织特异性表 达Cre酶的小鼠进行杂交后，可以在特定的组织或细胞中敲除该基因，而该基因在其它组织或细胞表达正常。

应用

1、用于具有胚胎致死性目的基因的研究；

2、用于研究基因在特定的组织或细胞中的生理病理功能；

3、与控制Cre表达的其它诱导系统相结合，还可以对某一基因的表达同时实现在时间和空间两方面的调控。

基因敲入小鼠

基因敲入可以在目的基因位置引入特定的突变或外源基因。比如在目的基因上引入点突变(模拟人类遗传疾病模型) ；或将报告基因(如EGFP，mRFP，mCherry，mYFP，或LacZ等)通过同源重组的方式引入目的基因的特定位点，从而可以通过报告基因来跟 踪目标基因的表达。也可以用报告基因取代小鼠本身的基因，使KO/KI同时发生。

应用

1、用于药物筛选相关研究；

2、用于信号通路的研究；

3、用于示踪的相关研究。

人源化小鼠

人源化小鼠模型是指带有功能性的人类基因、细胞或组织的小鼠模型。这种模型通常被用于人类疾病体内研究(in vivo study)的活体替代模型。由于人类生理与动物生理有显著的差别，利用动物模型得到的实验结果有时不能适用到人体上。比如， 有些利用小鼠等动物模型开发 的药物在人体上并没有效果。所以，利用转基因或同源重组的方法，将人类基因“放置”在小鼠模型上所制备的人源化小鼠模型，大大提高了这类小鼠模型作为模拟 某些人类疾病的有效性。

应用
1、在艾滋病、癌症、传染病、人类退化性疾病、血液病研究领域等都有广泛的应用；
2、药物临床前模拟实验。

KO-First技术制作基因敲除鼠

KO-First技术是通过在内含子中插入一个两边带有FRT位点的基因破坏盒来达到敲除的目的，这个破坏盒含有Splice acceptor，报告基因和Neo。除此之外，在目的基因敲除的外显子两侧各插入一个LoxP位点。因此得到的小鼠是目的基因敲除同时敲入报告基因与抗性基因的小鼠。通过灵活选择和Flp/FRT重组系统和Cre/LoxP重组系统，可达到同时获得完全性敲除和条件性敲除的实验目的。即当该小鼠与Flp小鼠交配时，可还原已敲除基因的表达，获得基因条件性敲除小鼠，在此基础上Cre小鼠交配又可获得目的基因敲除小鼠。